Diese Seite ist ein Mirror und dient ausschliesslich der Aufklaerung.
Dieses Material wurde mir freundlicherweise von Rolf Schaelike zu meiner freien Verwendung ueberlassen.

Aribert Deckers, 6.3.2007
"Wehrhafte Medizin!"

zurück zur Hauptseite
[ оригинальный текст ] - оригинальный текст К стартовой странице

  [ Немецкий вариант ] 


НОВЫЙ ПРЕПАРАТ “ГАЛАВИТ”:
МЕТОДЫ АНАЛИЗА И СТАНДАРТИЗАЦИИ

Т.Н.Боковикова, В.Л.Багирова, Е.П.Герникова,
О.А.Ваганова, Л.Н.Буланова, В.Е.Чичиро, М.Т.Абидов

ГНИИСКЛС МЗ РФ, ЗАО Центр современной медицины “Медикор”, Москва

Галавит - оригинальный отечественный препарат - представляет собой 5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-диона натриевую соль; получен по оригинальной технологии.

Галавит - модулятор функции макрофагов, оказывает противовоспалительный эффект, используется в лечении заболеваний, вызванных гиперактивностью макрофагов. Исследованиями доказано, что выделяемые макрофагами под действием токсинов грамотрицательных бактерий TNF-фактор, ИН-1 и нитросоединения (NO, NO2, NО3), инициирующие ЦГМФ-синтетазную реакцию, перекисное окисление липидов и образование реакционно-способных радикалов, вызывают развитие токсического синдрома и диареи, что ведет к возникновению различных обменных нарушений в органах и тканях. Эффективность противовоспалительной и антидиарейной терапии обусловлена способностью препарата уменьшать синтез TNF-фактора, ИН-1 и других острофазных белков из гиперактивированных макрофагов. Это достигается путем ингибирования макрофагами синтеза РНК, ДНК (на 6-8 часов) и одновременным усилением микробоцидной системы гранулоцитов, что предотвращает развитие патологического процесса. Препарат ингибирует гиперактивность макрофагов в легкой обратимой форме, оказывая ингибирующий эффект только на время применения [1, 2].

При анализе галавита было установлено, что некоторые методики, включенные в нормативный документ (НД) недостаточно совершенны и не позволяют объективно оценивать его качество.

На основании проведенных исследований разработаны и предложены более совершенные методики анализа препарата «Галавит».

Исходя из структуры молекулы галавита, подлинность препарата устанавливается на базе функционального анализа - по реакции хемилюминесценции, по образованию азокрасителя, по УФ и ИК спектрам.

Для производных 1,2,3,4-дигидрофталазиндиона, имеющих заместители в положении 2 и 3, характерна хемилюминесценция, которая возникает в процессе их окисления слабыми окислителями в щелочной среде. Экспериментально установлено, что голубая хемилюминесценция, возникающая при взаимодействии галавита с пергидролем в щелочной среде в присутствии калия ферроцианида (II) в качестве катализатора более четко наблюдается при использовании 5% раствора, а не 10% раствора, как указано в НД. Наличие в структуре молекулы галавита аминогруппы в 5-м положении позволяет идентифицировать его по образованию азокрасителя при взаимодействии препарата с раствором натрия нитрита и b-нафтола в щелочной среде. Следует отметить, что УФ спектр 0,001% раствора препарата в 0,1 М растворе натрия гидроксида в условиях, описанных в НД, нельзя считать достаточно информативным, поскольку максимум поглощения при 220 ± 2 нм в области от 200 до 260 нм характерен для многих органических соединений.

Для уточнения спектральных характеристик галавита в УФ области были сняты УФ спектры в различных растворителях: воде, 0,01 М растворе кислоты хлористоводородной (второе разведение), 0,1 М растворе натрия гидроксида и спирте 95% в концентрации 20 мкг/мл. В области от 200 до 400 нм УФ спектры галавита в воде и в 0,001 М растворе кислоты хлористоводородной практически совпадают и имеют максимумы поглощения при 222 ± 2 нм, 297 ± 2 нм (294 ± 2 нм) и 347 ± 2 нм и минимумы при 260 ± 2 нм и 320 ± 2 нм. УФ спектр препарата в 0,1 М растворе натрия гидроксида имеет максимумы поглощения при 222 ± 2 нм, 302 ± 2 нм, 347 ± 2 нм и минимумы при 258 ± 2 нм и 323 ± 2 нм, т.е. наблюдается незначительный батохромный сдвиг с одновременным гиперхромным эффектом. УФ спектр галавита в спирте 95% имеет максимумы поглощения при 298 ± 2 нм, 356 ± 2 нм и минимумы при 264 ± 2 нм и 324 ± 2 нм, т.е. наблюдается более выраженный по сравнению с щелочным раствором батохромный сдвиг с одновременным гиперхромным эффектом. Из полученных данных следует, что в указанных растворителях для галавита характерны и информативны УФ спектры в области от 220 до 400 нм, которые могут быть использованы для идентификации и его количественного определения в лекарственных формах.

ИК спектр препарата отличается от ИК спектра основания, выделенного с помощью уксусной кислоты по методике НД только двумя дополнительными полосами при 1550 и 1525 см-1. Указанный спектр является также информативным и может быть использован для подтверждения подлинности галавита, что позволит исключить дополнительные операции, связанные с осаждением и высушиванием основания - 5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазин-1,4-дион.

Экспериментально установлено, что 1% растворы образцов исследованных серий галавита выдерживали сравнение с эталоном цветности 5б, а не 7б.

Это можно объяснить несоответствием требований к качеству препарата, включенных в разделы «Описание» и «Цветность раствора». По НД галавит должен быть «белый или слегка желтоватого цвета кристаллический порошок», т.е. допускается две цветовые характеристики препарата - белый или слегка желтоватый цвет. Последнее согласуется с характеристикой основания [7]. В разделе «Цветность раствора» указано, что раствор препарата должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном 7б. Совершенно очевидно, что такие требования могут относиться к препарату белого цвета, имеющего оттенок, а не к препарату, который имеет собственную окраску. Поэтому правомочным является требование: 1% раствор препарата должен выдерживать сравнение с эталоном 5б.

При определении примесей сульфатов в препарате по НД пробу сжигают в тигле, зольный остаток прокаливают в течение 1 часа при 900°С. Из данных литературы известно, что фарфоровые тигли непригодны для сжигания и прокаливания натрийорганических соединений [3]. Платиновые тигли устойчивы по отношению к натрийорганическим соединениям в присутствии кислорода воздуха при прокаливании в течение 10-30 минут при температуре 500-550°С [3,4].

Экспериментально установлено, что при прокаливании пробы галавита в платиновых тиглях в условиях, описанных в НД, на стенках тигля образуется твердый темный налет, который практически невозможно полностью отделить от тигля. Остаток в тигле обрабатывали водой. Полученный раствор испытывали на содержание в нем сульфатов [5].

При добавлении раствора хлорида бария в испытуемых пробах всех образцов препарата наблюдалось значительное помутнение растворов с последующим выделением осадка. Это обстоятельство можно отнести за счет свойств галавита, как натрийорганического соединения, подвергшегося прокаливанию при температуре 900°С в течение 1 часа.

Определение примеси сульфатов в галавите по аналогии с другими натрийорганическими субстанциями (этазол-натрий, тиопентал-натрий и др.) можно проводить в фильтрате, полученном после отделения осадка, образующегося при прибавлении уксусной, серной, хлористоводородной или азотной кислот. Азотная кислота в данном случае более приемлема, так как в дальнейшем в полученном фильтрате можно определять и примеси хлоридов. Правильность выбранного способа была подтверждена двумя альтернативными методами: методом озоления - пробу сжигали в платиновом тигле в течение 20 минут при температуре 500°С [4] и методом сжигания в кислороде [5]. Образцы исследуемых серий препарата содержали менее 0,04% примесей хлоридов и менее 0,2% примесей сульфатов, что в 5 раз ниже допустимых норм, указанных в НД - не более 0,2% и не более 1% соответственно.

Количественное определение галавита в препарате по НД проводится методом титрования в среде неводных растворителей. При этом возникают сложности в определении изменения окраски индикатора в точке эквивалентности, что влияет на воспроизводимость, а следовательно и на объективную оценку результатов анализа. В поисках метода более совершенного и не связанного с использованием агрессивных веществ, были проведены исследования, которые показали возможность применения метода нитритометрического титрования в выбранных условиях [5]: навеску препарата растворяют в воде, прибавляют разведенную кислоту хлористоводородную до растворения осадка, образовавшегося от прибавления к испытуемому раствору первых порций кислоты; точку эквивалентности определяют потенциометрически; в качестве индикаторного электрода используют платиновый электрод, в качестве электрода сравнения - хлорсеребряный.

Определить точку эквивалентности с помощью внутреннего или внешнего индикаторов не представилось возможным, поскольку при добавлении к испытуемой пробе первых порций титранта - 0,1 М раствора нитрита натрия возникало интенсивное оранжевое окрашивание, которое мешало определению изменения окраски индикаторов.

Сравнительные данные результатов количественного определения галавита двумя указанными методами, основанными на свойствах первичной аминогруппы, приведены в таблице:

Категория
Найдено галавита, %
Метрологические характеристики
(серия 041197)
Титр. неводн.
Нитритометрия
Титр. неводн.
Нитритометрия
011197 99,30 99,30 X = 99,83 X = 99,73
021197 100,42 99,62 Sx = 0,433 Sx = 0,081
031197 100,31 99,33 AX = 0,4007 AX = 0,0850
041197 99,72 99,90 E% = 1,0618 E% = 0,2087
051197 100,24 99,64 E% = 0,4013 E% = 0,0852


Выводы

УФ спектры галавита в воде, спирте 95%, 0,01 М растворе кислоты хлористоводородной и 0,1 М растворе натрия гидроксида в области от 220 до 400 нм характерны, информативны и могут быть использованы для подтверждения подлинности и количественного определения (в лекарственных формах) галавита.

Для подтверждения подлинности галавита (натриевая соль) целесообразно использование ИК спектра, что позволяет исключить операцию выделения основания (5-амино-1,2,3,4-тетрагидрофталазина-1,4-диона), предусмотренную НД.

Предлагаемая усовершенствованная методика анализа галавита по показателям «Сульфаты» и «Хлориды» позволяет в 5 раз уменьшить допустимые нормы содержания указанных примесей.

Методика количественного определения галавита с помощью нитритометрического титрования исключает использование агрессивных растворителей, обеспечивая получение объективных и воспроизводимых результатов.



Литература:

1. Абидов М.Т., Пальцев А.П., Турьянов М. А.//Патент России № 008349 от 20.04.96 / «Способ моделирования грамположительного стафилококкового сепсиса».
2. Абидов М.Т., Хохлов А.П.//Патент России № 008364 от 20.04.96 / «Способ моделирования грамотрицательного сальмонелезного сепсиса».
3. Бермандинер М.Н., Шурыгин А.П.// Огневая переработка и обезвреживание промышленных отходов. - М., Химия,- 1990 г. - С.149.
4. Бок P.// Методы разложения в аналитической химии.- М., Химия, - 1984 г. - С.114, 146.
5. Государственная фармакопея XI издания, выпуск 1 и 2.
6. Красовицкий Б. М., Болотин Б. М.//Органические люминофоры. - М., Химия, 1984 г. - С.141.
7. Химическая энциклопедия//Люминол. - ДАФ-МЕД - т. 2.- М., Советская энциклопедия, - 1990 г.- С.224

"Фарматека" - №2 99


Letzte Bearbeitung dieser Seite am 17.01.2001